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使用制備液相色譜的工作流程和技巧

本文的重點是快速液相色譜和高效液相色譜。沒有一種完美的協(xié)議合適每一種別離目的。因此,建議為您的特定使用程序優(yōu)化辦法。經(jīng)過本文中列出的建議以及一些前期閱覽和測驗,您將輕松純化您正在尋找的組件。


        一、快速液相色譜純化


        運用快速色譜法進行純化的缺陷是該辦法固有的分辨率較低?焖僖合嗌V柱運用更大的粒徑和柱容量,允許運用更多的開始資料,但以分辨率和純度為價值。假如化合物不需求更高的純度,或者假如下一步將進行 HPLC,這或許是您的選擇。


        1、確認溶劑體系


        樣品的純度(即混合物中有多少化合物)能夠運用薄層色譜法 (TLC) 和組分的相對極性進行定性測定。運用 TLC 預(yù)先篩選*佳活動相和固定相將節(jié)省時間和金錢。依據(jù)所運用的溶劑,您或許需求在通風(fēng)柜中運轉(zhuǎn)色譜柱,因為存在潛在的危險煙霧。


        2、確認要運用的列


        選擇別離柱時要考慮樣品量。色譜柱裝載量因粒徑和體積而異。一般來說,快速液相色譜柱的*大裝載量約為硅膠重量的 10%。較大的色譜柱能夠處理千克數(shù)量的色譜柱,但假如您沒有那么多開始資料,那么您只會在硅膠和額定的溶劑上糟蹋金錢來運轉(zhuǎn)這些大型色譜柱。在確認液相剖析柱、基質(zhì)和溶劑后,您就能夠進行快速別離了。


        3、液相色譜柱


        不管您是自己裝柱還是購買一根預(yù)裝柱,按重量核算硅膠與化合物的比例(即硅膠:化合物)都將幫助您完成更有用的別離。恒譜生提供各種硅膠色譜柱,像uHPLCs高效液相C18-AQ剖析柱對親水性和極性化合物具有更強的保存才能和選擇性。


        假如包含了別離不太雜亂的溶液需求 30:1 到 50:1 的比率,但更雜亂的別離或許需求高達 120:1 的比率。手動運轉(zhuǎn)色譜柱時,切勿讓溶劑管線低于硅膠,不然氣孔會在硅膠上形成看起來像裂縫的長線。這大大降低了別離的功率。


         二、HPLC純化


       在 HPLC 上運轉(zhuǎn)樣品適當(dāng)簡略,因為在快速液相色譜柱上預(yù)純化進程中確認的許多參數(shù)都能夠使用于此進程。假如您在沒有預(yù)純化過程的情況下運轉(zhuǎn) HPLC 別離,請考慮運用上面列出的指南來開發(fā)合適的 HPLC 辦法。運用 HPLC 時的另一個考慮因素是核算的背壓。因為 HPLC 色譜柱的粒徑更小,可完成更高質(zhì)量的別離,因此這些體系往往在高壓條件下運轉(zhuǎn),而閃蒸別離的壓力相對較低。運用有關(guān)粒徑和形狀、色譜柱內(nèi)徑和溶劑規(guī)格的信息核算估計的背壓。


       與恒譜生技術(shù)支持專家進行簡略評論能夠節(jié)省您名貴的時間,并使您能夠在瞬間別離化合物!

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